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凍存管滅菌后出現污染或破損？通用滅菌技術
時間:2025-11-10 09:27來源:原創 作者:小編 點擊:
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一、凍存管滅菌常見問題及影響
凍存管作為樣本儲存的核心載體，滅菌環節直接關系到樣本完整性和實驗準確性。實際使用中，常出現滅菌后污染、管體變形開裂、密封性下降等問題，可能導致樣本交叉污染、活性喪失，甚至影響實驗數據可靠性。這些問題多與滅菌方式選擇不當、操作流程不規范、材質適配性忽略等因素相關，因此掌握科學的滅菌方法尤為重要。
二、凍存管通用滅菌方式及操作要點
（一）濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）
這是實驗室最常用的滅菌方式，適用于可耐受高溫高壓的聚丙烯（PP）、聚碳酸酯（PC）材質凍存管，滅菌原理為高溫蒸汽穿透殺滅微生物。
- 操作流程：
- 滅菌前：將清洗干凈的凍存管（開蓋狀態）放入滅菌籃，避免堆疊過密，確保蒸汽流通；加入適量去離子水，水位符合滅菌鍋要求。
- 滅菌參數：溫度 121℃、壓力 103.4kPa，持續 15-30 分鐘（根據凍存管規格調整，常規 1.8mL/2mL 管建議 20 分鐘）。
- 滅菌后：自然降壓至常壓，待溫度降至 80℃以下再開蓋，避免驟冷導致管體破損；取出后在無菌環境中晾干，密封保存。
- 注意事項：不可用于含有橡膠密封圈的凍存管（高溫可能導致密封圈老化）；避免滅菌后立即密封，防止管內殘留水汽滋生細菌。
（二）干熱滅菌
適用于耐高溫但不耐潮濕的凍存管或配件，如玻璃凍存管、金屬蓋凍存管，通過干熱空氣實現滅菌。
- 操作流程：
- 預處理：凍存管清洗后徹底干燥，避免水分影響滅菌效果；開蓋放入滅菌箱，保持間距。
- 滅菌參數：溫度 160-170℃，持續 2-4 小時；若溫度提升至 180℃，可縮短至 30 分鐘（需確認凍存管材質耐受溫度）。
- 冷卻與保存：滅菌完成后關閉電源，自然冷卻至室溫再取出，禁止中途開門（溫差過大易導致玻璃管破裂）；無菌環境下密封。
- 注意事項：聚丙烯材質凍存管不耐干熱高溫（通常耐受溫度≤121℃），不可采用此方式；滅菌過程中避免放入易揮發、易燃物品。
（三）輻照滅菌
適用于一次性使用的預滅菌凍存管，或需批量滅菌的場景，常用 γ
射線、電子束輻照，具有滅菌徹底、無殘留的特點。
- 操作要點：
- 選擇合規的輻照滅菌服務，確保輻照劑量在 25-50 kGy（符合 ISO 11137 滅菌標準）。
- 凍存管需密封包裝后輻照，避免滅菌后二次污染；輻照后檢查包裝完整性，無破損方可使用。
- 適用場景：無需自行操作，適合對滅菌效率要求高、避免實驗室污染的場景；注意輻照后的凍存管需在規定有效期內使用。
三、滅菌效果驗證與質量把控
- 無菌驗證：定期抽取滅菌后的凍存管，放入無菌培養基中培養 24-48 小時（37℃），觀察是否有菌落生長，確保滅菌合格率。
- 密封性測試：滅菌后將凍存管裝滿去離子水，密封后倒置 12 小時，檢查是否漏水，避免因滅菌導致密封性能下降。
材質檢查：每次滅菌后觀察凍存管外觀，若出現變形、變色、裂紋等情況，需排查滅菌參數是否超標或材質是否適配。
四、關鍵注意事項
- 材質適配：滅菌前確認凍存管材質，聚丙烯（PP）凍存管優先選濕熱滅菌，玻璃材質可選用干熱滅菌，避免材質與滅菌方式不匹配導致損壞。
- 清潔預處理：滅菌前必須徹底清洗凍存管，去除殘留樣本、灰塵等污染物，否則會影響滅菌穿透性，導致滅菌不徹底。
- 無菌環境：滅菌后操作需在超凈工作臺等無菌環境中進行，避免晾干、密封過程中引入污染物。
- 避免重復滅菌：多數凍存管僅可耐受 1-3 次濕熱 / 干熱滅菌，重復滅菌會導致材質老化、密封性下降，建議根據使用需求控制滅菌次數。
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